FDP [熒光素二磷酸酯四銨鹽]，該產(chǎn)品在與磷酸酶相互作用后，無色和非熒光FDP被水解成高熒光熒光素，其表現(xiàn)出優(yōu)異的光譜特性，與配備有氬激光激發(fā)的大多數(shù)熒光儀器的最佳檢測相匹配?；蛘?，F(xiàn)DP也可用于檢測發(fā)色模式中的磷酸酶，因為酶產(chǎn)物（熒光素）表現(xiàn)出很大的消光系數(shù)（接近100,000cm-1mol-1）。在一些文獻中，F(xiàn)DP被認為是最敏感的熒光磷酸酶底物之一。FDP已廣泛用于各種ELISA測定。此外，它還用于檢測酪氨酸磷酸酶。FDP是熱不穩(wěn)定的，需要特別注意保存固體樣品和儲備溶液。

1.準備工作解決方案：

1.1在升值溶劑中制備2至10 mM的儲備溶液。任何未使用的溶液需要等分并在<-20℃冷凍。

注意1：不要使用DMSO，ETOH或METH制備SunRed?磷酸鹽的原液，因為它可以顯著提高分析背景。

注意2：避免反復凍融循環(huán)，避免光照。

1.2制備2X磷酸鹽工作溶液：在實驗當天，將底物溶解在升值溶劑中或在室溫下解凍等份的儲備溶液（來自步驟1.1）。在100 mM Tris緩沖液或您選擇的緩沖液（pH 8至9）（非磷酸鹽緩沖液）中制備10至50μM的2X工作溶液。

2.在上清液中進行磷酸酶測定：

2.1將50μL2X磷酸鹽工作溶液（來自步驟1.2）加入磷酸酶標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中，使總磷酸酶測定體積為100μL/孔。

注意：對于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μL2X磷酸鹽工作溶液。

2.2在所需溫度下孵育反應30至120分鐘，避光。

2.3用熒光板讀數(shù)器檢測適當濾光片組的熒光增加。

2.4空白孔中的熒光（僅用測定緩沖液）用作對照，并從具有磷酸酶反應的那些孔的值中減去。